利用曲菌的蛋白发现系统取得高产脂肪酶

利用曲菌的蛋白发现系统取得高产脂肪酶

日本不仅重视其特有的生物酒精技术开发，还很重视与欧洲各国的技术协作，开发生物燃烧能源（BDF）技术。BDF的技术开发欧洲占全世界的90%，该技术在生产中会排出约10%的含碱甘油，这种副产物目前尚无有效的利用途径。一种固定化酶技术可以使上述情况得到改善，用该技术可得到高纯度的甘油，但由于反应过于缓慢尚未达到工业化的地步，为满足这一需求，各国正在开发高活性的固定化酶。

日本利用十分熟悉的食品酿造用丝状菌ASP.ORYZAR、ASP.NIPGER等曲菌，对其进行遗传性改良，包括对曲菌—葡糖苷酶基因启动子的改良和5’UTR（非翻译区）*适性的确认等，得到了高活性的脂肪酶。转基因蛋白质的得率高低，*重要的是转录，有必要通过多次反复利用淀粉酶基因中的基点元件而活化转录。曲菌—葡糖苷酶遗传基因的启动子连续存在着2个被称为REGION111的区域，在这里，对各种启动子12次反复导入REGION111然后对比大肠菌的葡萄糖醛酸酶（GUS）基因，发现源于ASP.ORYZAR葡糖淀粉酶基因的启动子活性提高了约4倍，源于ASP.NIPGER NO.8的启动子提高了6倍。再者，对曲菌的糖酵解基因中*常见的烯醇酶启动子导入REGION111其启动子活性提高了20多倍。接下来是通过改变5’UTR进而提高翻译调控的效率。在启动子P_NO8142的下流导入了包含源于PB1221的5’UTR，用它来置换曲菌的糖酵解酶基因的5’UTR，发现GUS的活性提高了8倍。